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    你真的會養細胞嗎?聊聊養細胞的這些事

    發布時間:2019-08-01

    培養細胞先得需要一款高品質的培養箱了,設備問題您可以咨詢江蘇金怡儀器。其次,細胞培養工作是需要一定的耐心的,作為新手,不經歷些什么,你還真不好意思說自己會養細胞。你真的會養細胞嗎?今天,我們就來聊聊養細胞的這些事

    一、培養基中的黑點

    在細胞培養過程中,有時候會發現有小黑點生成,小黑點就一定是污染嗎?其實不然。一旦發現,先我們要觀察培養基是否會渾濁,然后觀察培養細胞的狀態,如果污染的話,培養基可能會變混,變黃。黑點出現的原因可能有以下幾個方面:

    1、細胞生長老化,細胞碎片形態;

    2、血清質量不好,反復凍融; 經過熱處理的血清,沉淀物顯著增多,在倒置顯微鏡下觀察,也像是小黑點

    3、原代細胞培養過程中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。

    二、細胞不貼壁

    可能原因

    1、胰酶消化過度,解決方法:適當縮短胰酶消化時間或降低胰酶濃度。

    2、支原體污染,解決方法:分離培養物,檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染,丟棄培養物。

    3、培養瓶瓶底不干凈,解決方法:換用新的培養皿或者培養瓶。

    4、消化液或培養液配制錯誤、過期儲存、儲存不當,解決方法:重新配置消化液或培養液

    5、細胞老化,解決方法:見上

    6、接種細胞起始濃度太低或太高,解決方法:根據細胞特性接種適量的細胞。

    總之,養細胞需要耐心,要溫柔,要不然她真的會給你顏色看哦。

    三、細胞污染

    細胞污染的種類可分成細菌、霉菌、支原體、黑膠蟲、真菌和原蟲。主要的污染源為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染的血清和污染的細胞等。

    1、細菌:培養液一般會渾濁變黃,細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,對細胞生長影響明顯;

    2、霉菌:培養液清亮,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,時間長之后,細胞的活力狀態變差;

    3、支原體:一般培養液會變渾濁。支原體是牛血清中zui常見的微生物之一,而很多都沒有做支原體陰性檢測,不能用過濾的方法除去。除很有經驗的外,大多數支原體污染的細胞株,無法以其外觀來分辨細胞是否被支原體污染,而且支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數,代謝等數據。支原體檢測方法:PCRELISA、熒光染色等。

    4、黑膠蟲:培養液一般不混。可穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍鏡下為黑色點狀,高倍鏡下為黑色的小蟲游來游去。對細胞狀態不會有太大的影響,在細胞增殖旺盛的時候會自然消失。

    5、真菌:一般培養液清亮。鏡下會有絲狀物,有些真菌開始會像死細胞碎片,但是不像細胞碎片分不清,有很多很多小塊,想珊瑚狀,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌一般生長的鼻尖慢,不像細菌那么容易被發現。

    6、原蟲:培養液輕微渾濁,鏡下的點狀物數量很多,輕微活動,細胞雖然可以生長但是增殖速度明顯緩慢細胞狀態不好,邊緣不清,細胞不透亮。與細胞共生爭奪營養,等達到一定數量的時候就會影響到細胞的生長,形成惡性循環。

    理論上,當細胞發生污染時,是可以通過一定方法去除的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,建議發現污染時立刻棄掉,重新培養。嚴格無菌操作技術、清潔的環境、使用品質良好的細胞株和培養基是減少污染的zui好方法。

    四、生長緩慢

    細胞培養過程中比較常見的問題,主要原因如下:

    1、新配置的培養基以及換了新的血清,細胞不適應;解決方法,zui好使用zui適宜的培養基,如果條件不允許,可以換液時不要全量換液逐漸增加新的培養基比例,1/41/23/41,多傳代幾次,讓細胞慢慢適應。

    2、細胞密度不夠。有些細胞是細胞依賴性細胞,密度過低生長緩慢;也可能是細胞分泌促生長活性物質過少,細胞連接不好等原因。解決辦法:增加細胞接種密度;將細胞從大皿轉移至小皿培養;適當增加培養基血清濃度。

    3、培養環境改變:溫度、CO2、細胞的生存環境要適宜。溫度: 37 ℃; CO2: 5% pH: 72-74;滲透壓等

    4、污染:如支原體,細菌,真菌等

    5、細胞本身狀態:如衰老、、、解決辦法:及時換新的細胞

    當然如果培養細胞是原代的話,生長速度是比較緩慢的。如果沒有及時換液,營養成分不夠,細胞也會生長緩慢。用螺旋口瓶培養細胞時,需將瓶蓋微松,以保證通氣,要保持培養箱內空氣干凈等。

    其實只要條件適于細胞生長,細胞依舊是乖寶寶。

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